密理博/Millirore INYC00010 尼龍膜

millipore正電荷尼龍膜0.45um孔徑INYC00010 30cm*3m
 

Northern 和 Southern Blotting，以及 Colony 和 Plaque Lifts

Millipore 提供了一種用于核酸應(yīng)用轉(zhuǎn)印膜選擇。 使用帶正電的 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜可以在 Southern blotting、Northern blotting 和 colony/plaque lifts 實驗中獲得出色的結(jié)果。 Immobilon-NC 轉(zhuǎn)印膜，是主要的 Southern 和 colony/plaque 實驗方案中最初使用的膜，也可作為一種靈敏度較低但更經(jīng)濟(jì)的選擇。

 

說明: Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍卷膜，0.45 μm，30 cm x 3 m

商標(biāo)名: Immobilon

數(shù)量/包裝: 1

應(yīng)用: Southern blotting、Northern blotting、菌落/噬菌轉(zhuǎn)印、Dot/Slot blotting 和 DNA 分析

濾膜孔徑，μm: 0.45

相容的染料: Non-applicable

可潤濕性: 親水

主要吸附機制: 離子，紫外線固定后為共價的

濾膜尺寸，cm x cm: 30 x 300

替代物: INCP 000 10（核酸應(yīng)用）

濾膜代碼: INYC

濾膜顏色: 白色

產(chǎn)品名稱: Immobilon-Ny+ Transfer Membrane

濾膜表面: 光面
 

Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍轉(zhuǎn)印膜

Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉(zhuǎn)印膜，非常適合于可靠與可重現(xiàn)的轉(zhuǎn)移、固定、雜交及隨后的重復(fù)雜交實驗。 其表面均一分布的正電荷密度確保得到最高的靈敏度和最低的背景信號。 此膜經(jīng)強化處理具有超長的耐久性，這一點對于重復(fù)雜交試驗至關(guān)重要。

可提供詳細(xì)的實驗方案，在使用 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜時可用于優(yōu)化轉(zhuǎn)印結(jié)果。


 

• 靈敏度最高，而背景信號最小
   
• 非常出色的重復(fù)雜交特性
   
• 在化學(xué)發(fā)光法和放射性檢測系統(tǒng)中均表現(xiàn)出色

性能

Southern Blotting

直接比較三種帶正電尼龍膜在各自優(yōu)化實驗方案下的表現(xiàn)：每種膜在其推薦的紫外波長照射下交聯(lián)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜的雜交信號是其它兩種膜的 2 倍。

12 次重復(fù)雜交之后的信號強度

尼龍膜在 254 nm 交聯(lián)，并進(jìn)行了多次重復(fù)雜交，依次為：用 ³²P 標(biāo)記探針做 2 次雜交，4 次模擬雜交，用 ³²P 標(biāo)記探針做第 7 次雜交，然后進(jìn)行 5 次模擬雜交以及用 ³²P 標(biāo)記探針做第 13 次雜交。 在每個雜交周期之間，將膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實雜交完全一樣，區(qū)別在于未加 ³²P 標(biāo)記探針。 在整個重復(fù)雜交過程中， Immobilon-Ny+ 的信號強度是競爭產(chǎn)品 A 和 B 的兩倍。

檢測靈敏度

將凝膠上 DNA 的量減少到 0.01 ng。 0.1 lane（條帶）中的 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相對應(yīng)。 大約相當(dāng)于 10 μg 人類基因組 DNA 中一個單拷貝基因序列。 可通過對探針濃度加倍來提高靈敏度。 在 0.01 ng 條帶中，與競爭產(chǎn)品 A 相比，Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜靈敏度稍高，而背景信號更低。

用化學(xué)發(fā)光檢測進(jìn)行 Northern Blotting

鼠肝的全部 RNA （1 μg） 在甲醛瓊脂糖凝膠中電泳分離，然后通過毛細(xì)作用轉(zhuǎn)印到 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜和競爭產(chǎn)品帶正電尼龍膜 “A”。 與烘焙相比，通過紫外交聯(lián)固定RNA 能增強信號。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜比競爭產(chǎn)品 A 表現(xiàn)出更高的靈敏度。

Colony Lifts

將載有 pUC19 或 pLH2（2.0  kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19）的 JM109 混合細(xì)菌懸浮液置于瓊脂培養(yǎng)皿中，在 37°C 下培養(yǎng)過夜。 將培養(yǎng)皿在 4°C 下冷卻30 分鐘，將菌落（直徑大約 1–2 mm）轉(zhuǎn)印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上，或轉(zhuǎn)印至競爭產(chǎn)品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在254 nm， 60,000 μJoules/cm² 紫外光照射下  交聯(lián)。 然后用 a ³²P 標(biāo)記的 DNA 探針對膜進(jìn)行雜交，并使用磷屏成像系統(tǒng)顯色。